动物模型构建丨盲肠结扎穿刺法（CLP）诱导脓毒症模型

脓毒症是机体在严重感染等因素作用下，神经、免疫、内分泌及凝血等系统功能受损，引发免疫细胞过度活化，导致大量促炎细胞因子释放，触发全身炎症瀑布反应并持续加重的危重综合征。尽管脓毒症研究已达分子水平且临床治疗手段不断完善，脓毒症及其导致的休克、多器官功能障碍综合征（MODS）乃至多器官衰竭（MOF），仍是外科危重患者死亡的主要原因。盲肠结扎穿刺法（Cecum Ligation and Puncture, CLP）是构建脓毒症动物模型的经典方法，为相关临床研究奠定了重要的模型基础。

CLP脓毒症动物模型丨实验步骤

• 动物准备

选用体重21-25g的BALB/c或C57BL/6小鼠，或体重约220g的SD大鼠，性别不限。适应性饲养3-5天，实验前禁食12小时。

• 麻醉与备皮

动物麻醉后，仰卧位固定于手术板。腹部手术区域剃毛并常规消毒。

• 手术操作（无菌条件）

于腹中线作约2cm切口进腹。

定位回盲瓣，在距其远端约1/3盲肠处分离系膜（避免损伤主要血管）。

用3-0丝线结扎该处盲肠。

用18号注射针头贯穿穿刺结扎段盲肠1-2次，挤出少量肠内粪便，尽量避免损伤血管。

• 关腹与复苏

用4-0丝线间断缝合腹膜及皮肤。

立即皮下注射生理盐水（50ml/kg体重）进行液体复苏抗休克。

• 注意事项

动物选择：体重需严格符合要求（小鼠21-25g，大鼠200-220g），过轻或过重均影响模型稳定性。

无菌操作：手术环境、器械及操作过程必须严格无菌，避免外源性感染干扰。

术后护理：术后及时保温与充分补液对降低早期死亡率至关重要。

• 模型特征

造模后动物逐渐出现竖毛、腹泻、脓尿等症状，表现为饮水、进食及自主活动减少，昼夜活动节律紊乱。

CLP模型能有效模拟临床（尤其是继发于胃肠穿孔的）脓毒症病理过程，并良好反映脓毒症发展中免疫应答与血流动力学的动态变化。

CLP脓毒症动物模型丨Q&A常见问题解答

Q ：造模后动物死亡率过高？

需关注以下关键点：

结扎位置：结扎点靠近盲肠底部（如结扎75%盲肠）会构建为重度致死性模型（致死率近100%）。标准模型通常结扎1/2至2/3盲肠（文中指1/3处结扎）。

麻醉方式：优先选用异氟烷吸入麻醉。戊巴 bǐ 妥钠腹腔注射麻醉本身致死率较高。

液体复苏：术后必须立即补液（生理盐水，50ml/kg），并于3小时、6小时（即共两次）追加补液。

保温：术后维持动物体温，防止低体温休克致死。

饲养环境：术后动物置于清洁、尽量无菌的环境，预防继发感染。

Q ：死亡率过低，甚至无动物死亡？

此情况高度提示模型构建可能失败。

首要检查点：穿孔操作是否确实将盲肠内容物（粪便）有效挤入腹腔？这是诱发腹膜炎及后续脓毒症反应的关键步骤。

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